ستون c8 (3.9×۱۵۰mm , 4µm , waters) و فاز متحرک (۰٫۸ ml/min) شامل استونیتریل، متانول و ۰٫۰۵ mol/ml و اسید با نسبت ۱۳:۱۳:۷۴ استفاده شد. هیچ کدام از نمونه ها بررسی شده با آزمون رپید اختصاصی باقیمانده‌ای از آنتی‌بیوتیک تتراسایکلین نشان ندادند. در تمام نمونه‌ها که توسط آزمون HPLC بررسی شدند مقدار کمی تتراسایکلین جدا شد. از هیچکدام از نمونه‎ های باقیمانده‌ی کلروتتراسایکلین جدا نشد. تمام نمونه‌ها مورد آزمون باقیمانده تتراسایکلین را نشان دادند. اکسی‌تتراسایکلین در ۶/۵۰% از نمونه‌های مورد آزمون دیده شد.
در [۱۱] یک روش سریع و حساس برای جداسازی باقیمانده آنتی‌بیوتیک‌های اکسی‌تتراسایکلین (OTC)، تتراسایکلین (TC) و کلراتتراسایکلین (CTC) در گوشت بوفالو شرح داده شد. اولین مرحله استخراج به وسیله بافر MCIIvaine که PH آن ۸۵/۳ است سپس شستشو فاز مایع است. در این آزمون فاز معکوس ستون c8 استفاده شد و اجزاء در دمای ۳۵ درجه سانتی‌گراد از هم تفکیک شدند. و برای فاز مایع از اکسالیک اسید بافر (۰۱/۰ M) با PH:1.6 و استونیتریل/متانول (۷۷:۱۸:۵ , v/ v/ v ) استفاده شد که سرعت آن ۰٫۶ L ̷ min بود. طول موج جدا کنندهPDA بر روی ۳۵۵ nm تثبیت شده بود. حد تشخیص این روش برابر با ۰٫۰۳۱ µg ̷ g و کمترین مقداری که می‌توانست تشخیص دهد ۰٫۰۶۲ µg ̷ g در ارزیابی آماری نشان داده شد که برآورد تفکیکOTC و TC و CTC از نمونه‌های شاهد مثبت در سه مرحله خالص سازی بالاتر از ۷۸% برای تمام داروها بود.

این روش نیز برای ۱۲۲ گوشت بوفالو صادراتی که از مناطق مختلف هند جدا شد به کار گرفته شد که از ۵ نمونه‌ی آن مقداری باقیمانده OTC جدا شد که کمتر از استانداردهای جهانی بود که توسط سازمان غذا و دارو اروپا و آمریکا تعیین شده بود. TC و CTC در هیچ کدام از نمونه‌ها یافت نشد.
در [۹] ۴۰۸ نمونه از گوشت مرغ و شیر گاو از ۱۰ ناحیه بانکوک در طول تابستان ۲۰۰۰ تا ۱۹۹۹ به صورت اتفاقی برای جداسازی نئومایسین و جنتامایسین و پنی‌سیلین G جمع‌ آوری شد. این آزمون توسط روش الایزا انجام شد. ۸ نمونه از ۴۰ نمونه گوشت مرغ دارای نئومایسین به اندازه ۵٫۹۶۹±۰٫۰۱۵ تا ۶٫۹۷۷±۰٫۰۱۲ pp بود.
بیشترین مقدار نئومایسین مربوط به منطقه بانکوکیا بود و بیشترین مقدار استرپتومایسین و پنی‌سیلین G از nonthaburi prorince جداسازی شد. ۲۶ نمونه از ۴۰ نمونه گوشت مرغ دارای استریپتومایسین به اندازه ۳۰٫۲۳۳ ppb تا ۲۴٫۸۵۲± ۰٫۰۱۲ بود. مقدار باقی مانده پنی‌سیلین G در بافت‌ها ۱٫۲۴۱ ppb تا ۰٫۳۲۴ بود که مقدار نمونه‌های مثبت ۵ از ۴۰ نمونه بود.
گوشت خوک از ناحیه minburi جدا شد که حاوی مقدار زیادی استرپتومایسین بود ( ۱۸ نمونه از ۴۰ نمونه) در ادامه نمونه‌های جدا شده از ناحیه chathuchalk حاوی مقدار زیادی جنتامایسین (۶ نمونه از ۴۰ نمونه) و پنی‌سیلین G (5 نمونه از ۴۰ نمونه) بودند. نمونه‌های جدا شده از bangsua حاوی مقدار بالایی نئومایسین بود ( ۵ نمونه از ۴۰ نمونه). مقدار نئومایسین، جنتامایسین، استرپتومایسین و پنی‌سیلین به ترتیب ۶٫۰۸۵ ± ۰٫۰۲ تا ۶٫۲۵۹ ppb،۱۰۵٫۲۵ ppb تا۸۹٫۲۲۲ ppb ، ۲۸٫۹۹۸ ppb تا ۲۸٫۰۱۸± ۰٫۰۱۷ و ۱٫۳۱۲ ppb تا ۰٫۴۷۲ قابل انتظار بود. تمام نمونه‌های شیر دارای باقیمانده جنتامایسین به اندازه ۵٫۳۶۶ ± ۰٫۰۲۵ ppb تا ۴٫۷۴۰ ± ۰٫۹۲۸ بود.
۳۳ نمونه از ۴۰ نمونه حاوی استرپتومایسین به اندازه ۵۲٫۶۵۰± ۰٫۰۲۵ ppb تا ۱۹٫۴۸۶ ± ۰٫۰۲۲
و ۵ نمونه از ۴۰ نمونه حاوی نئومایسین بود به اندازه ۰٫۴۷۴ ppb تا ۰۳۹۰ بود و پنی‌سیلین G جدا نشد. بیشترین باقیمانده آنتی‌بیوتیک متعلق به نئومایسین و استرپتومایسین در bangkokyia،sumpuntawong و bangsua بود.
بر اساس داده‌های بدست آمده اکثر نمونه‌های جمع‌ آوری شده قابل استفاده بوده، به غیر از نمونه‌هایی که از ناحیه chathuchak جمع‌ آوری شده و برای سلامتی انسان مضر بود. که این نمونه‌ها نمونه‌های گوشت خوک بود.
در [۲۲] برای بررسی جداسازی باقیمانده آنتی‌بیوتیکB-Lactum از شیرهای پروسه نشده فروشگاه‌ها در سال ۲۰۰۶ است. نمونه‌های به صورت اتفاقی از شهرهای حیدرآباد و لطیف آباد و قاسم آباد جمع آوری شدند. آزمون‌های میکروبی مانند استفاده از باسیلوس سوبتیلیس و روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا استفاده شد.
۱۳۷ نمونه جمع‌ آوری شده، در میان ۱۳۷ نمونه ۵/۶۳% منفی بودند و ۵/۳۶% مثبت بود و از آن آنتی‌بیوتیکB-Lactum جدا شد. محدوده مثبت بین ۵/۰۰ و ۱۵/۰۰ mm یعنی ۸٫۹۱ ± ۰٫۳۶ mm بود. میزان باقیمانده بین ۰٫۴ تا ۴۰۰ µg /L برای پنی‌سیلین G، ۱٫۰ تا ۱۹۰ µg/L برای آموکسیسیلین، ۰٫۵ تا ۱۴۱µg/L برای آمپی‌سیلین و ۱ تا ۱۲۲ µg/ L برای آنتی‌بیوتیک‌های نامشخص بود.
باقیمانده پنی‌سیلین G در شیرهای پروسه نشده ۱۴/۹ و ۱۱۹ فولد و ۹/۵۳ و ۳/۱۶ فولد بیشتر از استانداردهای EU (42 g/L) و FDA (5 and 10 µg/L) بود. و ۹٫۰۳ و ۳٫۱۶ فولد برای آموکسیسیلین و ۱۱٫۷۳ و ۴٫۶۹ فولد برای آمپی‌سیلین بیشتر از استانداردهای EU (42 g/L) و FDA (5 and 10 µg/L) بود.
برای اندازه گیری همزمان ۱۹ دارو از سه خانواده(seven penecillins and cephalosporin and five quinolones) در شیر گاو در قا نون اروپا از روش LC/MS/MS استفاده می‌شود. برای ساده‌تر شدن روش برای آمادگی نمونه‌ها مرحله حذف پروتئین به حلال آلی حذف شد. پاک سازی SPE و غلضت سازی به وسیله OASIS HLB CARTRIDGE انجام شد. پاک سازی و استخراج آنتی‌بیوتیک بدست آمده با بهره گرفتن از ستون C8 با یک شیب شستشو در ۱۱ دقیقه انجام شد. ۸۹% از داروهای جدا شده ۶۵% بالاتر از انتظار بود.AMOX %57 DAN %38 . LOD اعداد بدست آمده از ۰۳/۰ تا ۵/۰ g/kgµ است وLOQ از ۱/۰ تا ۲۵/۱g/kg µ است. این روش برای ۴۹ نمونه انجام شد.۳۷% از نمونه‌ها به این روش جواب نداده و یا امکان وجود اشتباه در انها زیاد بود. از بررسی آنالیز تمام نمونه‌ها ۱۴% از نمونه‌ها حاویAMOX و ۱۶% حاوی PENG بود. AMOX وPENG معمولاً به عنوان باقی مانده آنتی‌بیوتیکی در نمونه‌های شیر جدا شده.
[۱۶]۱۰۰۰ نمونه شیر خام گاو از تبریز و سراب به صورت تصادفی انتخاب و نمومنه برداری شد از مارچ ۲۰۱۰ تا نوامبر ۲۰۱۰ تمام شیرها به وسیله تستCOPAN (CHR.HANSEN.DENMARK) آزمایش شدند. حدود ۵% از نمونه‌های شمال غرب ایران مثبت بودند و دارای باقی مانده آنتی‌بیوتیک بودند. این بررسی نشان داد که کنترل مانیتورینگ شیر در منطقه شمال غرب ایران برای کنترل و شناسایی با قیمانده آنتی‌بیوتیکی ضرورت دارد.
[۷] نمونه‌های گوشت از بزهای عمان و سومالی و گوسفندهای استرالیا و سومالی به صورت اتفاقی تهیه شد. این نمونه برداری در طول آپریل ۲۰۰۴ انجام شد. از کیت‌های مخصوص الایزا برای جدا سازی باقیمانده آنتی‌بیوتیک و عوامل آنابولیک استفاده شد. به طور معمول نمونه‌های گوشت حاوی باقی آنتی‌بیوتیکی بودند. تتراسیکلین بین ۵۳ppkg-44 (mean49.8) و استرپتومایسین ۲۰-۰ (mean 11) کلرامفنیکل بین /۰-۰/۰۸ (mean 0/02) است. عوامل آنابولیک با قیمانده در گوشت بین ۰-۰/۰۵ و۰-۳۵ و برای کلسترول۱۷، ۰-۰/۱۶ و بتاتستسترون و تربنولون هم امکان وجود داشت. به هر حال مقدار این با قیمانده‌ها کمتر از استانداردی بود که توسط GRCP وEU تعیین شده است. گوشت بز سومالی که مقدار کمی آنتی‌بیوتیک و عوامل آنتی‌بیوتیک داشت با گوشت دیگر حیوانات مقایسه شد که به عنوان گوشت سالم و مطمئن برای مصرف کننده ارائه شده بود. گوسفندهای استرالیا مقدار باقیمانده کم ولی بزهای سومالی دارای باقیمانده زیادی بودند. معمولاً گوشت بزها آنتی‌بیوتیک و عوامل آنابولیک بیشتری نسبت به گوشت گوسفندان داشتند با یک تفاوت معنی دار در تتراسایکلین. این تفاوت در گوشت‌های بز سومالی بیشتر دیده شد. این تحقیقات نشان داد که گوشت گوسفند و بز فروخته شده در عمان معمولاً حاوی مقداری از باقیمانده‌های ‌آنتی‌بیوتیکی و عوامل آنابولیکی است.

مواد و روش‌های استفاده شده

مواد

مواد و محلول‌ها مصرفی

Sample dilution buffer (20 ml, 4ˣ concentrated)
Rinising buffer (30 ml, 20ˣ concentrated)
Substrate solution (12 ml, ready to use)
Stop solution (15 ml, ready to use)
Conjugate (lyophilized, blue cap)
Antibody (lyophilized, yellow cap)
Standard solution 100 ng/ml (1 ml, ready to use)
Recontitution/zero Standard buffer (10 ml, ready to use)
Standard solution 1
Standard solution 2
Standard solution 3
Standard solution 4
Standard solution 5
Standard solution 6
اتیل استات(merk )
ایزواکتان/ تریکلرومتان(Merk)
ان‌هگزان) Merk )
استات امونیوم(Merk )
اسید استیک اسید(Merk )
متانول(merk )
Lauryl Sulfate Broth، Lot Number: 1.10266.0500، Expire Date: 2017/6/6، (Merk)
Selenit enrich ment، Lot Number: 1.07717.0500، Expire Date: 2015/02/21، (Merk)
Salmonella shigella Agar، Lot Number: 1.07667.0500، Expire Date: 2015/03/24، (Merk)
Triple Suger Iron Agar، Lot Number: 1.03915.0500، Expire Date: 2015/09/27، (Merk)
SIM Medium، Lot Number: M181-500G، Expire Date: 2013/11، (Himedia)
Urea Agar، Lot Number: 1.08487.0500، (Merk)
Lysine Decarboxylase Broth، Lot Number: M376-500G، Expire Date: 2014/12، (Merk)
Anti Serum، Lot Number: 9202، (BaharAfshan)
Salmonella Anti Serum Poly Serogroups A
Salmonella Anti Serum Poly Serogroups B
Salmonella Anti Serum Poly Serogroups C
Salmonella Anti Serum Poly Serogroups D
Lactose Broth، Lot Number: 1.07661.0500، Expire Date: 2016/08/03، (Merk)
EC Broth، Lot Number: 1.0765.0500، Expire Date: 2016/05/04، (Merk)
Tryptone Water، Lot Number: 1.10859.0500، Expire Date: 2016/05/19، (Merk)